層析法是利用不同物質理化性質的差異而建立起來的技術。所有的層析系統都由兩個相組成：一是固定相，它或者是固體物質或者是固定于固體物質上的成分；另一是流動相，即可以流動的物質，如水和各種溶媒。當待分離的混合物隨溶媒（流動相）通過固定相時，由于各組份的理化性質存在差異，與兩相發生相互作用（吸附、溶解、結合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量對比）不同，而且隨溶媒向前移動，各組份不斷地在兩相中進行再分配。與固定相相互作用力越弱的組份，隨流動相移動時受到的阻滯作用小，向前移動的速度快。反之，與固定相相互作用越強的組份，向前移動速度越慢。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組份，從而達到將各組份分離的目的。
表 按層析原理分類
名稱 分離原理
吸附層析法 組份在吸附劑表面吸附固定相是固體吸附劑，各能力不同 分配層析法 各組份在流動相和靜止液相（固相）中的分配系數不同 離子交換層析法 固定相是離子交換劑，各組份與離子交換劑親和力不同
凝膠層析法 固定相是多孔凝膠，各組份的分子大小不同，因而在凝膠上受阻滯的程度不同 親和層析法 是根據生物大分子和配體之間的特異性親和力（如酶和抑制劑、抗體和抗原、激素和受體等），將某種配體連接在載體上作為固定相，而對能與配體特異性結合的生物大分子進行分離的一種層析技術。親和層析是分離生物大分子**為有效的層析技術，具有很高分辨率。
表 按操作形式不同分類 名稱 操作形式
柱層析法 固定相裝于柱內，使樣品沿著一個方向前移而達分離
薄層層析法 將適當粘度的固定相均勻涂鋪在薄板上，點樣后用流動相展開，使各組份分離 紙層析法 用濾紙作液體的載體，點樣后用流動相展開，使各組份分離
薄膜層析法 將適當的高分子有機吸附劑制成薄膜，以類似紙層析方法進行物質的分離
依流動相分
根據流動相的形式分類，層析可以分為液相層析和氣相層析。 1、氣相層析是指流動相為氣體的層析。 2、液相層析指流動相為液體的層析。
Rf值：主要是紙上層析法的用詞。源自流速（rate of flow）。溶劑從原點滲透到距離a（一般在20—30厘米時測定）的時候，如果位于原點的物質從原點向前移動到b，那么b/a的值（0.0—1.0）就是這種物質的Rf值。
