一、目的 

了解并掌握氨基酸紙層析的原理和方法。  

二、原理 

以濾紙為支持物的層析法，稱為紙層析法。紙層析所用展層劑大多由水和有機溶劑組成。展層時，水為靜止相，他與濾紙纖維親和力強；有機溶劑為流動相，它與濾紙纖維親和力弱。有機溶劑在濾紙上又下向上移動的，稱為上行法；有上向下移動的，稱為下行法。 

將樣品在濾紙上確定的原點處展層，由于樣品中各種氨基酸在兩相中不斷進行分配，且他們的分離系數各不相同，所以不同的氨基酸隨流動相移動的速率也不相同，于是各種氨基酸在濾紙上就相互分離出來，形成距原點不等的層析點。在一定條件下（室溫、展層劑的組成、濾紙的質量、PH值等不變），不同的氨基酸有固定的移動速率（Rf值） 

Rf=原點到層析點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離 

用混合氨基酸做樣品時，如果只用一種溶劑展層，由于某些氨基酸的移動速率相同或相近，就不能將它們分開，為此，當用一種溶劑展層后，可將濾紙旋轉90度，以**次所的層析點為原點，在用另一溶劑展層，從而達到分離的目的。這種方法稱為雙向層析法。 

本試驗主要介紹的是單向層析法。其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸組成。 

 

三、實驗儀器    1、 新華濾紙    2、 層析缸    3、 細線    4、 點樣管    5、 橡皮筋    6、 電吹風    7、 噴霧器  

四、實驗試劑 

1、混合氨基酸溶液（甘氨酸，苯丙氨酸），甘氨酸溶液，苯丙氨酸溶液 2、展層劑：正丁醇：12%氨水：95%乙醇：蒸餾水=13：3：3：1（v:v） 3、0.5%茚三酮—無水丙酮溶液：0.5g茚三酮溶于100ml無水丙酮，貯于棕色瓶中  

 

五、試驗步驟  

1、取濾紙剪成20×10厘米的濾紙條一張，在一端打孔，系一根細線，在另一端2~3cm處用鉛筆畫一橫線，中間畫一圓點（原點）。 

2、取毛細管一支(回收)，吸取氨基酸混合液，在原點處點樣，樣點直徑不宜超過5mm,每點一次用吹風機吹干，點2~3次為佳。 

   3、點樣后將濾紙放入層析缸中展層，注意點樣線要高于層析液面，濾紙不要貼在層析缸璧上，當展層**另一端1~2cm處時，停止展層（大約2~3小時）。    4、取出濾紙，用鉛筆記下溶劑前沿，然后用熱風吹干（或烘箱60℃）烘干。    5、均勻噴上茚三酮—無水丙酮液，注意使溶液不倒流，不間斷。    6、用吹風機吹干，觀察層析點，確定其幾何中心。 

   7、量取數值，計算各自的Rf值，與表中標準氨基酸Rf值比較，確定樣品氨基酸種類。（書上圖譜橫著看） 

 

六、實驗結果 

1.標準氨基酸單向上行層析法 定性、定量測定： 

將樣品在濾紙上確定的原點處展層，由于樣品中各種氨基酸在兩相中不斷進行分配，且他們的分離系數各不相同，所以不同的氨基酸隨流動相移動的速率也不相同，于是各種氨基酸在濾紙上就相互分離出來，形成距原點不等的層析點。 

甘氨酸層析點中心到原點的距離：0.4cm 苯丙氨酸層析點中心到原點的距離：3.2cm 原點到溶劑前沿的距離:10.8cm 

在一定條件下（室溫、展層劑的組成、濾紙的質量、PH值等不變），不同的氨基酸有固定的移動速率（Rf值） 

Rf=原點到層析點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離 Rf(甘氨酸)= 0.4cm/10.8cm =0.037 Rf(苯丙氨酸)= 3.2cm/10.8cm =0.296