一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;
1、理解并掌握薄層層析法的原理。
2、掌握氨基酸薄層層析法的正確的操作步驟。
3、掌握根據(jù)不同物質(zhì)的移動速率（Rf值）來鑒定被分離的混合物的各種組分。
二、實(shí)驗(yàn)原理
1.薄層層析原理
薄層層析時(shí)一般是將固體吸附劑涂布在平板上形成薄層作為固定相。當(dāng)液相（展開溶劑）在固定相上流動時(shí)，由于吸附劑對不同氨基酸的吸附力不一樣，不同氨基酸在展開溶劑中的溶解度不一樣，點(diǎn)在薄板上的混合氨基酸樣品隨著展開劑的移動速率也不同，因而可以彼此分開。（即通過吸附-解吸-再吸附-再解吸的反復(fù)進(jìn)行，而將樣品各組分分離開來） 2.氨基酸與茚三酮的顯色反應(yīng)
茚三酮水化后生成水化茚三酮，它與氨基酸的羧基反應(yīng)生成還原茚三酮、氨及醛，與此同時(shí)，還原茚三酮又與氨及茚三酮縮合生成紫紅化合物而使氨基酸斑點(diǎn)顯色。
3.基于相對遷移率Rf值判定混合氨基酸組分
薄層層析中，物質(zhì)沿溶劑運(yùn)動方向遷移的距離與溶液前沿的距離之比為Rf值
因?yàn)槲镔|(zhì)在一定溶劑中的分配系數(shù)是一定值，故其移動速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根據(jù)Rf值來鑒定被分離的物質(zhì)。
三、材料與方法
A材料： 1樣品：
（1）0.01mol/L丙氨酸：稱取丙氨酸8.9mg溶于90%異丙醇溶液**10mol。 （2）0.01mol/L精氨酸：稱取精氨酸17.4mg溶于90%異丙醇溶液**10mol。 （3）0.01mol/L甘氨酸：稱取甘氨酸7.5mg溶于90%異丙醇溶液**10mol。 （4）混合氨基酸溶液：將0.01mol/L丙氨酸、精氨酸、甘氨酸按等體積制成混合溶液 2試劑：
（1）硅膠G(C.P)。
（2）0.5%羧甲基纖維素鈉（CMCNa）：取羧甲基纖維素鈉5g溶于1000ml蒸餾水中，煮沸，靜置冷卻，棄沉淀，取上清備用。
（3）展開溶劑：按80:10:10比例（V/V/V)混合正丁醇、冰醋酸及蒸餾水，臨用前配制
（4）0.1%茚三酮溶液：取茚三酮（A.R.)0.1g溶于無水丙酮（A.R.)**100ml。 （5）展層-顯色劑：按照10:1比例（V/V)混勻展開劑和0.1%茚三酮溶液。 3儀器及器材：
①層析板（6cmx15cm）；②小燒杯；③量筒（10ml）；④小尺子；⑥毛細(xì)玻璃管；⑦層析缸；⑧烘箱 B實(shí)驗(yàn)步驟
四、結(jié)果與討論
結(jié)果： A層析結(jié)果
注：層析結(jié)果圖從左到右依次順序?yàn)楸彼帷⒏拾彼帷⒕彼帷⒒旌习被?
B實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：
表1各氨基酸色斑中心**樣品原點(diǎn)中心距離及溶劑前緣**樣品原點(diǎn)中心距離記
討論
1，對于實(shí)驗(yàn)所得的層析結(jié)果，發(fā)現(xiàn)存在層析板左緣（滴加丙氨酸的一緣）的溶劑前緣較層析板右緣（滴加的混合氨基酸溶液一緣）的溶劑前緣距原點(diǎn)中心遠(yuǎn)（兩者相差0.12cm）。 分析其原因可能為：
①層析板的制作存在誤差，導(dǎo)致層析板左右緣在厚度和均勻程度上存在差異，進(jìn)而導(dǎo)致在板的兩緣層析液的移動速率存在差異；
②放置層析板時(shí)未垂直放置導(dǎo)致層析板偏向右緣，層析液擴(kuò)散的起點(diǎn)不同導(dǎo)致層析結(jié)果的左右緣的溶劑前緣距原點(diǎn)中心的距離不同。
2，除上述實(shí)驗(yàn)中層析板的制作誤差及層析板放置誤差外，還可能存在的其他誤差有：
①測定色斑中心**原點(diǎn)中心的距離時(shí)存在測量誤差； ②點(diǎn)樣時(shí)未確保各加樣點(diǎn)在同一水平線上。
上述兩點(diǎn)誤差都可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果中由混合氨基酸溶液分離開的斑點(diǎn)計(jì)算所得的Rf值與其相對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)氨基酸Rf值不同。
